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說說蛋白質(zhì)聚集體可以做哪些檢測呢

更新時間:2021-06-28      點擊次數(shù):1966
  蛋白質(zhì)聚集體是蛋白類藥物研發(fā)和商業(yè)化過程中一個重要的挑戰(zhàn)之一。聚集體在蛋白質(zhì)產(chǎn)品開發(fā)和生產(chǎn)過程的所有階段都可以觀察到,如蛋白表達、純化、凍干等??赡軐Ξa(chǎn)品的質(zhì)量和功效有顯著的負面影響,其通常會減弱蛋白生物活性。此外蛋白聚集體可能存在潛在增強免疫原性的風險。
 
  蛋白質(zhì)聚集體的積累是許多神經(jīng)退休性疾病的共同病理特征,并且與老化也密切相關。然而我們還不了解聚集體是怎樣形成和如何清除的;以及在它們的清除中,分子伴侶、蛋白酶和其它調(diào)控因子的復雜網(wǎng)絡是怎樣形成的。
 
  很多研究運用有力的干擾,比如熱休克或蛋白酶抑制產(chǎn)生聚集體。然而這些壓力是非常強的而且是非特異性的,會引起全局細胞應激反應和無關蛋白聚集。另外有人運用對polyQ融合突變的亨廷頓蛋白的遺傳干擾進行聚集體研究。盡管有較高的特異性,但這些系統(tǒng)顯示對于聚集開始的時間和聚集形成的程度控制性很差。
 
  蛋白質(zhì)聚集體的檢測
 
  1.可溶聚集體
 
  最小的可溶聚集體是二聚體,可溶聚集體的大小上限則因蛋白質(zhì)和溶液條件而異。這些可溶的蛋白聚集體,無論是通過物理相互作用還是化學修飾,通常可以用SEC-HPLC檢測。該方法的局限在于樣品在層析柱中的稀釋可能會導致聚集體的解離、不同蛋白質(zhì)需要不同的流動相、同時流動相或高壓也可能會誘導蛋白質(zhì)形成聚集體。
 
  除此之外,其他的一些可以檢測蛋白質(zhì)聚集體的方法有原位動態(tài)光散射、原位靜態(tài)光散射、分析超離心法、原子力顯微鏡、石英晶體微天平、電噴霧-差分電遷移率分析等。
 
  2.不可溶聚集體
 
  一般來說,不可溶聚集體包括亞可見微粒(<100μm)和各種形式的可見聚集體或顆粒??梢婎w粒體/聚體的形貌取決于聚集機制和或?qū)嶒灄l件(如溶液pH)。
 
  傳統(tǒng)的檢測亞可見微粒的方法是光屏蔽法,但其在檢測半透明顆粒和特征尺寸小于2μm的顆粒方面能力有限。流動成像分析因為其高的靈敏度、形態(tài)信息及可區(qū)分某些類型的顆粒而被廣泛應用于聚集體的檢測。

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